1.血红蛋白低于60g/L
恶性肿瘤患者所致贫血的治疗主要是抗癌治疗,辅以补充缺乏的造血物质,当血红蛋白低于60g/L时,可考虑输入浓缩红细胞。
2.输血次数
多次输血可输入某些病毒,产生抗HLA抗体,从而出现热原性输血反应,
输入的血小板遭破坏,为超量化疗后的骨髓移植带来困难。因此仅疾病晚期病情严重,为保证化疗顺利完成,或并发感染、出血等,才需要输血,一般给浓缩红细胞,以少量为宜。
3.慎用血细胞制品
粒细胞减少症常见于恶性肿瘤侵犯骨髓或由于大剂量化疗、放疗造成的骨髓抑制、一般不宜输注粒细胞,应用粒系集落刺激因子,或粒单集落刺激因子即可取得良好疗效。
4.输血影响患者的免疫功能
研究表明输血能降低自然杀伤细胞活性,降低辅助性T细胞和抑制性T细胞(T4/T8)的比例,降低吞噬细胞对炎性刺激的反应,使具有免疫抑制作用的前列腺素E增加。
5.痰液脱落细胞检查标本采集方法
采集痰液的基本要求:采集痰液的质量和方法直接影响痰检查阳性率。采集痰液的基本要求是:①痰液必须新鲜。②痰液必须是肺部咳出。
(一)细胞学检查方法
(1)痰液细胞学检查:方法简便易行,患者无痛苦,适用于肺癌高危人群的普查。
(2)支气管液细胞学检查:为在纤维支气管镜下直接吸取支气管液作涂片;或对可疑部位刷取、冲洗及细针吸取标本。
(3)经皮肺部细针吸取检查:为在X线或CT引导下作穿刺获得标本。主要应用于经痰液、支气管液细胞学检查仍为阴性的患者、无痰液患者和肺转移病灶患者。
(二)肺部良性病变脱落细胞
1.炎症病变的脱落上皮细胞
(1)假复层纤毛柱状上皮细胞:包括:固缩退变、多核纤毛柱状细胞、核增大的柱状上皮细胞、纤毛柱状上皮细胞增生、储备细胞增生、鳞状化生细胞、纤毛柱状上皮细胞衰变。
(2)鳞状上皮细胞:退化变性、巴氏细胞。
2.炎症细胞成分
(1)肺泡吞噬细胞:来自血中单核细胞,细胞体积大,胞质丰富,核圆形、卵圆形或肾形,略偏位,染色质均匀细致偶见核仁。
1)尘细胞:吞噬灰尘的巨噬细胞。
2)心衰细胞:肺淤血时,巨噬细胞吞噬了血红蛋白,胞质内可含有多量粗大的棕色含铁血黄素颗粒。
3)泡沫细胞:吞噬脂质的巨噬细胞,胞质呈泡沫状,细胞明显变大。
(2)其他炎症细胞:多见中性粒细胞、大量嗜酸性粒细胞和夏科-莱登结晶,还常见淋巴细胞,浆细胞较少见。
中性粒细胞核象是指外周血中中性粒细胞的分叶状况。正常核象:中性粒细胞以3叶核为主,杆状核与分叶核之比为1:13,无幼稚细胞。
6.外周血中杆状核粒细胞增多或(和)出现晚幼粒、中幼粒、早幼粒等细胞时称为核左移。包括:再生性左移:指核左移伴有白细胞总数增高者,表示机体反应性强、骨髓造血功能旺盛。见于感染(尤其急性化脓性感染)、急性中毒、急性溶血、急性失血等。分为:轻度左移,白细胞总数及中性粒细胞百分数略增高,仅杆状核粒细胞增多(>5%),表示感染程度较轻,机体抵抗力较强。中度左移,白细胞总数及中性粒细胞百分数均增高,杆状核粒细胞>10%并有少数晚幼粒细胞和中毒性改变,表示有严重感染。
重度左移,白细胞总数及中性粒细胞百分数明显增高,杆状核粒细胞>25%,并出现幼稚的粒细胞。退行性左移:指核左移而白细胞总数不增高、甚至减低者。见于再生障碍性贫血、粒细胞减低症、严重感染(如伤寒、败血症等)。
7.通常利用单核细胞在37℃和Ca2+存在条件下,能主动粘附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性,据此建立许多从单个核细胞悬液中去除单核细胞的方法,藉以获得高纯度的淋巴细胞群。
(1)粘附贴壁法
将已制备的单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中,移至37℃温箱静置1h左右,单核细胞和粒细胞均贴于平皿壁上,而未贴壁的非粘附细胞几乎为纯淋巴细胞,继用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。因B细胞也有贴壁现象,用本法分离的淋巴细胞群中B细胞有所损失。
(2)吸附柱过滤法
将单个核细胞悬液注入装有玻璃纤维或葡聚糖凝胶SephadexG10的柱层中,凡有粘附能力的细胞绝大部分被吸附而粘滞在柱层中,从柱上洗脱下来的细胞主要是淋巴细胞。此法简单易行,对细胞极少损害。
(3)磁铁吸引法
利用单核细胞具有吞噬的特性,在单个核细胞悬液中加直径为3μm的羰基铁颗粒,置37℃温箱内短时旋转摇动,待单核细胞充分吞噬羰基铁颗粒后,用磁铁将细胞吸至管底,上层液中含较纯的淋巴细胞。
8.可溶性粘附分子检测
多采用双抗体夹心ELISA,研究最多的选择素家和免疫球蛋白超家族。前者有E、L、P三型,均可见血液中。溶血性尿毒症和血小板减少性紫癜患者血液中,P选择素比正常人高2~3倍,而败血症、HIV感染和艾滋病患者血液中L选择素明显增高。
血液中存在可溶性E选择素是内皮细胞激活的证据,败血症、糖尿病等患者血液中E选择素水平增高,一般与疾病的活动性无关,而与器官受损程度相关。
如败血症患者,可溶性E选择素可增高20倍以上,据称与疾病的严重性或预后有关。肝炎、肝硬化等患者血液中超免疫球蛋白家族中ICAM-1水平增高,与肝功能损害指标相关。总之,现已发现许多疾病可见细胞粘附分子数量的异常,但这类工作尚处于探索阶段,有待深入研究和资料的积累才能判断其确切的临床意义。
9.巨噬细胞功能的检测
人巨噬细胞可从外周血或经斑蝥激发的皮疱液中获取,也可从肺灌洗液或患者腹膜透析液中分离,但操作繁锁,得量不多。许多实验室在进行基础或配合临床研究巨噬细胞功能及其与疾病的关系、或筛检免疫增强药物和探讨其作用机制时,常选用小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,常用的检测方法如下。
(1)炭粒廓清试验
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒,脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒,据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液),间隔一定时间反复取静脉血,测定血中炭粒的浓度,根据血流中炭粒被廓清的速度,判断巨噬细胞的功能。
(2)吞噬功能的检测
巨噬细胞具有较强的吞噬功能,实验室常用比细菌大的细胞性抗原作为被吞噬颗粒,如鸡红细胞。其检测原理是将受检细胞与适量的颗粒抗原混合后,置37℃保温0.5~1h,其间时加振摇,最后离心取测定细胞制成涂片,染色镜检,分别计数出吞噬百分比和吞噬指数。各实验室应根据自己的条件建立正常参考值。
(3)巨噬细胞溶酶体酶的测定
巨噬细胞富含溶酶体酶,如酸性磷酸酶、非特异性酯酶、溶菌酶等,测定这些酶的活性也是衡量巨噬细胞功能的实用指标之一。
10.酸磷酸酶的测定
(1)硝酸铅法:本法优点是用普通试剂,价格便宜,一般实验室均有条件做,封片后可较长时间保存,并可用电子显微镜研究观察细胞的超微结构。缺点是细胞必需固定,而且固定条件要求严格,如处理不当酶活性易消失,反应步骤也较多。
该法基本原理是在适当的酶性条件下,巨噬细胞内的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸钠水解成磷酸盐后,后者与硝酸铅反应产生磷酸铅,而磷酸铅再与硫酸铵反应则形成黑色硫化铅,沉积在胞浆内酸所在处,显示棕黑色颗粒。酶活性强弱可根据颗粒的数量和粗细不同而分级判断,颗粒数量少则细的为+,颗粒多而粗的为++,颗粒很多且很粗的为+++。
(2)偶氮法:本法操作简便,反应液中的底物α-萘磷酸钠被酸性磷酸酶分解后,形成萘酚和磷酸盐,而萘酚结构中的羟基(-OH)邻近的活泼碳原子,立即与偶氮染料起反应,而产生鲜艳的棕色沉积在酶所在处,缺点是封片后保存时间短。
11.非特异性酶的测定该酶比较稳定,酶活性丧失较慢,细胞经涂片干燥,置室温至少可保存半天至一天,因此特别有利于临床检验室采用。
常用α-萘醋酸法,该酶可将-萘醋酸分解成萘酚和醋酸,萘酚迅速与偶染料结合,形成有色反应物而沉积。

