1.免疫印迹法的检测原理
免疫印迹法是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来的一项检测蛋白质的技术，它将SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的高特异性相结合。
（1）一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳动速度就越快。此阶段分离效果肉眼不可见(只有在染色后才显出电泳区带)。
（2）二阶段为电转移。此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。
（3）三阶段为酶免疫定位。将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜(相当于包被了抗原的固相载体)依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。常用的HRP底物为3，3-二氨基联苯胺(呈棕色)和4-氯-1-萘酚(呈蓝紫色)。阳性反应的条带清晰可辨。并可根据SDS-PAGE时加入的分子量标准，确定各组分的分子量。
2.检验项目选择原则介绍
（1）针对性
主要是应根据所需提供何种信息来确定检验项目的选择。如对糖尿病患者显然检查血糖、糖化血红蛋白、尿糖十分重要;治疗过程中的监测用末梢血及血糖仪进行床旁监测(POCT)是完全可以的，但要用于确诊就不一定合适。又如怀疑乳腺癌的女性患者，选择特异性前列腺抗原就无此必要;多数肿瘤标志物用于早期诊断效果并不理想，但用于疗效及病情观察价值更大些。又如当某种疾病治疗后观察治疗效果时，显然选择应是针对其疗效有价值的特定试验，但当观察治疗过程中不良反应时，则需检查有关功能性试验，如肝功、肾功、造血功能等中有关检验项目。
（2）有效性
主要应考虑该项检验对某病诊断的敏感度及特异度。由于敏感度和特异度都有一定的限度，因此在不同情况下，侧重点可能有所不同。如人群筛查时，应考虑敏感度较高的检验项目，以避免漏诊，为了确诊，则应选用特异度较高的试验，以避免误诊;
（3）时效性
强调及时。特殊情况下应有补充措施。如急性心肌梗死患者急诊就诊时，应先用干化学法(POCT)进行肌钙蛋白T或I检测，但同时应作定量测定;一些标本细菌培养前不妨同时涂片镜检，作出初步报告。
（4）经济性
应从成本/效益关系来考虑。主要要从总体考虑患者的经济支出。这里有两方面的问题要解决：一是过度检查，作一些不必要的检查，造成患者检查费用的增加;另一种情况是选用一些质量不太可靠的项目/或应该做的检查项目而没有全部申请检验，暂时的检查费用少了，但延长了诊疗时间，患者整个医疗费用可能更增加了。
3.细菌的遗传性状
（1）带电现象：细菌的蛋白质和其他生物细胞的蛋白质相似，具有两性游离的性质，当正电荷与负电荷相等时，为等电点。革兰阳性菌等电点低，革兰阴性菌等电点稍高。细菌的带电现象与细菌的染色反应、凝集反应、抑菌和杀菌作用有密切关系。
（2）表面积：细菌体积虽小，但单位体积的表面积远比其他生物细胞大。细菌的表面积大，有利于菌体内外界的物质交换，故细菌生长繁殖迅速。
（3）光学性质：细菌细胞为半透明体，所以细菌悬液呈浑浊状态。细菌越多，浊度越大。
（4）半透性与渗透性：细菌的细胞壁和细胞膜都有半透性，使细菌与外界进行物质交换，可允许水分子通过，而对其他物质则有选择性通过作用。
4.空腹血糖检查是诊断糖尿病最可靠的方法。
一般对尿糖阳性或尿糖虽阴性但有高度怀疑的病人，均无原则做空腹血糖测定。一般正常人空腹全血血糖值≤110mg/dL(6.1mmoL/L)，血浆血糖值≤125mg/Dl(6.9mmoL/L)。如果空腹全血血糖≥120mg/dL(6.7mmoL/L)，血浆血糖≥140mg/dL(7.8mmoL/L)，经过2次重复测定结果相同，即可诊断为糖尿病。其中对于血糖过高，已达到上述标准者，虽尿糖阴性，变可明确诊断。若空腹血浆血糖>120mg/dL(6.7mmoL/L)，但<140mg/dL(7.8mmoL/L)为诊断可疑，需进一步做餐后2小时血糖检查或糖耐量试验检查。若空腹血浆血糖<120mg/dL，并且重复几次结果大致相仿，基本上可除外糖尿病。但是也有例外的情况，如轻型或早期糖尿病，尤其是在饥饿状态下，空腹血糖可正常，只是表现餐后血糖超过正常。
所以，对空腹血糖正常者，也不可轻易除外本病。对于可疑病例，应连续数次测空腹血糖或采用餐后2小时血糖和糖耐量试验，方可最后肯定诊断。
5.胎儿成熟度检验
（1）胎儿肺成熟度检查
①羊水泡沫试验(振荡试验)
检查方法：一般采用双管法，第1支试管羊水与95%乙醇的比例为1:1;第2支试管比例为1:2，用力振荡15～20s后，静置15min后观察结果。
结果判断：①两管液面均有完整的泡沫环为阳性，意味着L/S≥2，提示胎儿肺成熟。②若第一管液面有完整的泡沫环，而第二管无泡沫环为临界值，提示L/S<2。③若两管均无泡沫环为阴性，提示胎儿肺未成熟。
②羊水吸光度测定
羊水吸光度(A)试验是以羊水中磷脂类物质的含量与其浊度之间的关系为基础。检测方法：测定波长为650nm时羊水的吸光度值。结果判断：A650>0.15为临界值。
②.卵磷脂/鞘磷脂(L/S)测定
检测方法：薄层色谱法(TLC)。
结果判断：①正常L/S≥2。②L/S<1：表示胎儿肺不成熟，易发生IRDS。③L/S=1.5～1.9：表示胎儿肺不够成熟，可能发生IRDS。④L/S=2.0～3.4表示胎儿肺已成熟，一般不会发生IRDS。⑤L/S=3.5～3.9表示胎儿肺肯定成熟。⑥L/S≥4.0表示过熟儿。
（2）胎儿肾成熟度检查
①肌酐测定
结果判断：①妊娠34～36周时肌酐≥132.4μmol/L，足月妊娠时肌酐≥176.5μmol/L。②危险值为<132.4μmol/L。③安全值为>176.5μmol/L。④132.4～176.5μmol /L为临界值。
临床意义：从妊娠中期起，羊水中肌酐逐渐增加。本试验主要反映胎儿肾小球的成熟度。
②葡萄糖的测定
妊娠23周羊水中葡萄糖浓度逐渐增加，24周达高峰，以后随胎儿肾成熟，肾小管对葡萄糖重吸收作用增强，胎尿排糖量减少，加上胎盘通透性随胎龄增加而减低，羊水葡萄糖浓度逐渐减低。
结果判断：①临产时可减低至0.40mmol/L以下。②羊水葡萄糖<0.50mmol/L，提示胎儿肾发育成熟。③>0.80mmol/L为不成熟。
（3）胎儿肝成熟度检查
改良J-G法测定法结果判断
①正常胎儿羊水胆红素应<1.71μmol/L。②1.71～4.61μmol/L为临界值，胎儿可能有不正常情况。③>4.61μmol/L胎儿安全受到威胁。④>8.03μmol/L多有胎儿窘迫。⑤母胎血型不合溶血羊水中胆红素达16.2μmol/L时，应采取终止妊娠措施，否则胎儿多难存活。
分光光度计测定法结果判断
A450：①<0.02，提示胎肝成熟。②0.02～0.04，为胎肝成熟可疑。③>0.04，为胎肝未成熟。
（4）胎儿皮脂腺成熟度检查
①检测方法
脂肪细胞经1g/L尼罗蓝溶液染色后为无核橘黄色细胞，而其他细胞则染成蓝色。计数200～500个细胞，计算出染橘黄色细胞百分率。
②结果判断
羊水中脂肪细胞出现率：>20%则认为胎儿皮肤已经成熟;10%～20%为临界值;<10%则认为胎儿皮肤不成熟;>50%表示过期妊娠。
（5）胎儿唾液腺成熟度检查
结果判断：羊水淀粉酶>300U/L，为胎儿唾液腺成熟的指标;200～300U/L为临界值;<200U/L为胎儿唾液腺不成熟;>120U/L提示唾液腺成熟(somogyi法)。
