1.血清与血浆的区别
血清=全血+离心(分离出的淡黄色液体)
血浆=全血+抗凝剂+离心(分离出的淡黄色液体)。
血清与血浆的区别记忆口诀:血浆抗凝出凝血,血清清白缺因子。
血液由血细胞(红细胞、白细胞、血小板)和血浆组成。离体后的血液自然凝固,分离出来的淡黄色透明液体称为血清。血液加抗凝剂后分离出来的淡黄色液体称为血浆。血清与血浆的差别是:血清缺少某些凝血因子,如凝血因子Ⅰ(纤维蛋白原)、Ⅱ(凝血酶原)、Ⅴ、Ⅷ等。
全血适用于临床血液学检查,如血细胞计数、分类和形态学检查等。血浆适用于血浆生理性和病理性化学成分的测定,特别是内分泌激素测定;血浆除钙离子外,含有其他全部凝血因子,也适用于血栓与止血的检查。血清适用于临床化学和临床免疫学检查。
2.常用抗凝剂和使用方法
(1)常用抗凝剂和使用方法:
①乙二胺四乙酸(EDTA)盐:常用有钠盐或钾盐,能与血液中钙离子结合成螯合物,使Ca2+失去凝血作用,阻止血液凝固。
EDTA盐对血细胞形态、血小板计数影响很小,适用于血液学检查,尤其是血小板计数。
根据国际血液学标准化委员会(ICSH)建议,CBC抗凝剂用EDTA-K2•2H2O,量为1.5~2.2mg/ml血液。不适于凝血检查、血小板功能试验。
②草酸盐:常用有草酸钠、草酸钾、草酸铵,溶解后解离的草酸根离子能与样本中钙离子形成草酸钙沉淀,使Ca2+失去凝血作用,阻止血液凝固。草酸盐不适于凝血检查。
双草酸盐抗凝剂:草酸钾可使红细胞体积缩小,草酸铵则可使红细胞胀大,两者按适当比例混合,恰好不影响红细胞形态和体积,可用于血细胞比容、CBC、网织红细胞计数等项目检查。双草酸盐抗凝剂可使血小板聚集、影响白细胞形态,不适于血小板计数、白细胞分类计数。
③肝素:加强抗凝血酶(AT)灭活丝氨酸蛋白酶作用,阻止凝血酶的形成,并阻止血小板聚集等作用,从而阻止血液凝固。肝素是红细胞渗透脆性试验的理想抗凝剂。但肝素可引起白细胞聚集,瑞氏染色后产生蓝色背景,不适于CBC、细胞形态学检查。
④枸橼酸盐:常用有枸橼酸钠,能与血液中钙离子结合形成螯合物,阻止血液凝固。枸橼酸钠与血液的抗凝比例为1:9或1:4。适用于红细胞沉降率、凝血检查,是输血保养液的成分。
3.瑞氏染色法
(1)瑞氏染料:由酸性染料伊红(E)和碱性染料亚甲蓝(M+)组成。伊红通常为钠盐,有色部分为阴离子。亚甲蓝(又称美蓝)为四甲基硫堇染料,有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐,即氯化美蓝,有色部分为阳离子。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料(即天青)。将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中,即为瑞氏染料。甲醇的作用:一是溶解美蓝和伊红;二是固定细胞形态。
(2)染色原理既有物理的吸附作用,又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同,对各种染料的亲和力也不一样。如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色或蓝色,称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫红色,称为嗜中性物质;原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质,染成较浓厚的蓝色;中幼红细胞既含酸性物质,又含碱性物质,染成红蓝色或灰红色;完全成熟红细胞,酸性物质彻底消失后,染成粉红色。
(3)pH值的影响:细胞各种成分均属蛋白质,由于蛋白质系两性电解质,所带电荷随溶液pH而定,在偏酸性环境中正电荷增多,易与伊红结合,红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红,细胞核呈淡蓝色或不染色;在偏碱性环境中负电荷增多,易与美蓝结合,所有细胞呈灰蓝色,颗粒呈深暗,嗜酸性颗粒呈暗褐,甚至棕黑色,中性颗粒偏粗,呈紫黑色。稀释染液必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则可导致细胞染色反应呈色异常,形态难以识别,甚至错误。
4.红细胞平均指数
(1)检测原理红细胞平均指数包括:红细胞平均体积(MCV),每个红细胞平均体积的大小,以飞升(fl)为单位;红细胞平均血红蛋白含量(MCH),即每个红细胞内平均所含血红蛋白的量,以皮克(pg)为单位;红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC),即平均每升红细胞中所含血红蛋白量,以g/L为单位。
(2)方法学评价
1.MCV 当红细胞凝集(如冷凝集综合征)、严重高血糖症可使MCV假性增高。
2.MCH 高脂血症、白细胞增多症可使MCH假性增高。
3.MCHC 受Hct(血浆残留或出现异常红细胞)和Hb(高脂血症、白细胞增多症)的影响。
(3)质量控制
①手工法 红细胞计数、血红蛋白、血细胞比容测定数据必须准确可靠。
②血液分析仪法 利用人群红细胞平均指数相当稳定的原理,用XB分析法或浮动均值法对血液分析仪进行质量控制。
(4)参考值
不同人群红细胞指数的参考范围
MCV(fl) | MCH(pg) | MCHC(g/L) | |
新生儿 | 86~120 | 27~36 | 250~370 |
成人 | 80~100 | 26~34 | 320~360 |
(5)临床意义 红细胞平均指数可作为贫血形态学分类依据
贫血的红细胞形态学分类
贫血分类 | MCV | MCH | MCHC | 贫血 |
正细胞贫血 | 正常 | 正常 | 正常 | 再生障碍性贫血、急性失血性贫血、某些溶血性贫血 |
大细胞贫血
| 增高 | 增高 | 正常 | 各种造血物质缺乏或利用不良的贫血 |
单纯小细胞贫血 | 减低 | 减低 | 正常 | 慢性感染、慢性肝肾疾病性贫血 |
小细胞低色素贫血 | 减低 | 减低 | 减低 | 缺铁性贫血及铁利用不良贫血,慢性失血性贫血 |
4.血液保存液种类、主要成分及作用
(1)血液保存液常用种类:配方可分为:ACD(A,枸橼酸;C,枸橼酸三钠;D,葡萄糖)与CPD(C,枸橼酸三钠;P,磷酸盐;D,葡萄糖及枸橼酸)两大类保存液。在CPD中加腺嘌呤即为CPDA-1。
(2)血液保存液的主要成分及作用:
①枸橼酸盐:是所有抗凝保存液中的基本抗凝物质。最常用的是枸橼酸三钠,除抗凝作用外,它还能阻止溶血的发生。
②枸橼酸:避免保存液中的葡萄糖在消毒中焦化。
③葡萄糖:是红细胞代谢所必需的营养成分,可延长红细胞保存时间,且防止溶血;并减慢细胞中有机磷的消失,防止红细胞储存损伤。
④腺嘌呤:可促进红细胞ATP合成,延长红细胞的保存期(达35d),并增强红细胞放氧功能。
⑤磷酸盐:提高保存液pH,延长红细胞的保存期。ACD液pH较低,对保存红细胞不利,只能保存21d,且放氧能力迅速下降。CPD保存液中加入腺嘌呤与磷酸,从而延长红细胞的生存期。
5.交叉配血法:主侧加受血者血清与供血者红细胞;次侧加受血者红细胞与供血者血清,观察两者是否出现凝集。
6.ABO血型鉴定的正反定型:
①正向定型:用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。
②反向定型:用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。
7.血液保存液常用种类:配方可分为:ACD(A,枸橼酸;C,枸橼酸三钠;D,葡萄糖)与CPD(C,枸橼酸三钠;P,磷酸盐;D,葡萄糖及枸橼酸)两大类保存液。在CPD中加腺嘌呤即为CPDA-1。
8.成分输血的优点:①疗效高:将血液成分提纯、浓缩而得到高效价的制品。②反应少:可减少输全血引起各种不良的抗原抗体的免疫反应。③合理用血液成分:将全血分离制成不同的细胞及血浆蛋白成分,供不同目的应用。④经济:既可节省宝贵的血液,又可减低患者的医疗费用。
9.尿标本保存常用的防腐剂:
①甲醛:又称福尔马林。对尿细胞、管型等有形成分的形态结构有较好的固定作用。
②甲苯:可在尿标本表面形成一层薄膜,阻止尿中化学成分与空气接触。常用于尿糖、尿蛋白等化学成分的定性或定量检查。
③麝香草酚:可抑制细菌生长,保存尿有形成分,用于尿显微镜检查、尿浓缩结核杆菌检查,以及化学成分保存。
④浓盐酸:用作定量测定尿17-羟、17-酮、肾上腺素、儿茶酚胺、Ca2+等标本防腐。
⑤冰乙酸:用于检测尿5-羟色胺、醛固酮等的尿防腐。
⑥戊二醛:用于尿沉淀物的固定和防腐。
10.多尿、少尿和无尿的定义:
①多尿指24h尿总量成人超过2500ml者,儿童超过3L者。
②少尿指24h尿量少于400ml。
③无尿指尿量<100ml/24h。
11.肉眼血尿和镜下血尿的定义:
①肉眼血尿:当每升尿含血量达到或者超过1ml时,尿呈淡红色、洗肉水样,雾状或云雾状,外观混浊。
②镜下血尿:尿经离心沉淀镜检时发现红细胞数>3/HP。
12.尿三杯试验:如血尿以第一杯为主,多为尿道出血;以第三杯为主,多为膀胱出血;如三杯均有血尿,多见于肾脏或输尿管出血。
13.乳糜尿产生的机制:
①泌尿系淋巴管破裂:多因淋巴循环受阻,从肠道吸收的乳糜液,逆流进入泌尿系统淋巴管,致使淋巴管内压不断增高而破裂,淋巴液进入尿中所致。
②深部淋巴管阻塞:乳糜液不能流入乳糜池,而逆流到泌尿系统淋巴管所致。

