【离子选择电极法】
离子选择电极(ISE)是一种电化学传感器,其结构中有一个对特定离子具有选择性响应的敏感膜,将离子活度转换成电位信号,在一定范围内,其电位与溶液中特定离子活度的对数呈线性关系,通过与已知离子浓度的溶液比较可求得未知溶液的离子活度,按其测定过程又分为直接测定法和间接测定法,目前大部分采用间接测定法,由于间接测定法将待测样本稀释后测定,所测离子活度更接近离子浓度。
ISE法具有标本用量少,快速准确,操作简便等优点。是目前所有方法中最为简便准确的方法。缺点:电极具有一定寿命,使用一段时问后,电极会老化。
【肝昏迷的生化机制】
1.氨中毒学说:认为肝功能不全时,血氨的来源增多或去路减少,引起血氨升高。高浓度血氨干扰脑组织的能量代谢,抑制神经细胞膜的作用,影响神经递质的作用等,从而出现脑功能障碍而导致昏迷。
2.假神经递质学说:肝功能不全时,由于肝内单胺氧化酶活性降低或门体侧支循环的形成,致一些与去甲肾上腺素和多巴胺极为相似的假性神经递质在网状结构的神经突触部位堆积,使神经突触部位冲动的传递发生障碍,从而引起神经系统功能障碍而导致昏迷。
3.氨基酸不平衡与肝昏迷:在严重肝功能损伤和有门静脉短路条件下,血中支链氨基酸浓度明显降低,芳香族氨基酸明显增高,当大量芳香族氨基酸进入脑细胞,使假性神经递质生成增多,并抑制去甲肾上腺素合成,最终导致肝性昏迷。
4.γ-氨基酸学说:肝功能衰竭时,肝不能清除肠源性γ-氨基酸,使血中γ-氨基酸浓度增加,造成中枢神经系统功能抑制。
【淋巴细胞系统的组成】
1.原始淋巴细胞(lymphoblast):10~18μm,胞体圆形或椭圆形,核呈圆形或椭圆形,核染色质呈细颗粒状,核仁1~2个;胞浆量少,呈淡蓝色,透明,无颗粒。
2.幼稚淋巴细胞(prolymphocyte):10~16μm,核圆形或椭圆形,核染色质仍较细致,核仁可有可无;胞浆量较少,淡蓝色,偶见有少许红色颗粒。
3.淋巴细胞(lymphocyte)
①大淋巴细胞:12~15μm,核圆形稍偏于一侧,核染色质排列紧密均匀,深紫红色;胞浆量相对较多,染透明淡蓝色,可有少量大小不等的红色嗜天青颗粒。
②小淋巴细胞:6~9μm,核相对较小,呈圆形,核染色质紧密呈大块状,结构不清楚,染深紫红色;胞浆极少,似裸核样,如可见则呈淡蓝色,一般无颗粒。
【误差和不确定度】
区分误差和不确定度很重要,因为误差定义为:被测量的单位结果和真值之差。
由于真值往往不知道,故误差是一个理想的概念,不可能被确切地知道。
但不确定度是可以一个区间的形式表示,如果是为一个分析过程和所规定样品类型做评估时,可适用于其所描述的所有测量值。
因此,测量误差与测量不确定度无论从定义、评定方法、合成方法、表达形式、分量的分类等方面均有区别。
【免疫浊度法原理】
当可溶性抗原与相应抗体在两者比例合适时,抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物,使反应液出现浊度,如形成的复合物增加,反应液的浊度随之增加,与一系列的标准品对照,即可计算出受检物的含量。
按照仪器设计的不同分为透射比浊仪测定法和散射比浊仪测定法。测定方法又可分为速率法和终点法。
【凝胶内沉淀试验】
凝胶内沉淀试验是利用可溶性抗原和相应抗体在凝胶内扩散,形成浓度梯度,在抗原与抗体浓度比例恰当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。
凝胶支持物的种类:凝胶支持物的种类有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶等。不同分子量的物质在凝胶中扩散速度不同,藉此可用以识别不同待测物分子量的差别。
【免疫电泳技术原理】
免疫电泳技术实质上是在直流电场作用下的凝胶扩散试验。它的原理是将凝胶扩散置于直流电场中,在一定的条件下,抗原及抗体离解成为带正电或负电的电子,在电场中向异相电荷的电极移动,所带净电荷量越多、颗粒越小,泳动速度越快,反之则慢。由于电流加速了抗原、抗体的运行速度,缩短了两者结合的时间,加快了沉淀现象的产生。当有多种带电荷的物质电泳时,由于静电荷不同,而区分成不同区带,使抗原决定簇不同的成分得以区分。
影响因素有:①电场强度;②溶液pH;③离子强度;④电渗等。
【总补体溶血活性影响因素】
1.参考范围:比色法:60~120kU/L.
2.影响因素
(1)在补体测定中标本采集与保存极为重要,即待检标本要新鲜。一般静脉取血后,置室温1h使血液凝固,分离血清后最好2h之内检测完毕,否则应尽快置-20℃保存,避免反复冻溶,以防补体活性降低。
(2)补体活性不甚稳定,56℃30min、剧烈振荡、酸碱、乙醇、乙醚、肥皂、蛋白酶等均可使其灭活,因此检测所用器皿要洁净并呈中性。
(3)该实验影响因素较多,操作要严格,溶血素、绵羊红细胞等配制要准确。
3.临床意义:
补体是存在于正常人和脊椎动物新鲜血清中的一组不耐热、经活化后具有酶活性的复杂球蛋白,统称为补体系统,目前已发现该系统包含有30多种可溶性蛋白和膜结合蛋白,其中大部分由肝脏和脾脏中的巨噬细胞合成。补体是机体重要的防御因子,广泛参与抗微生物防御反应及免疫调节,能与任何一种抗原-抗体复合物结合并被激活,产生溶解靶细胞、促进吞噬、清除免疫复合物、参与炎症反应等一系列生物活性反应,同时也可介导变态反应及自身免疫性疾病的病理损伤。
(1)CH50升高常见于各种急性期反应,如急性炎症(风湿热急性期、结节性动脉炎、皮肌炎、伤寒、麻疹、黑热病、肺炎、急性心肌梗死、甲状腺炎、阻塞性黄疸)、组织损伤、恶性肿瘤特别是肝癌等可较正常高2~3倍。
(2)CH50降低补体消耗增加见于血清病、链球菌感染后肾小球肾炎、SLE、冷球蛋白血症、自身免疫性溶血性贫血、类风湿性关节炎、移植排斥反应等;补体大量丧失见于肾病综合征、大面积烧伤、外伤、手术和失血过多;补体合成不足见于肝硬化、慢活肝、急性肝炎重症患者等。
(3)判断补体检测结果时应注意动态观察,最好数种补体成分同时检测,以便对患者病情进行综合分析。

