α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE)
(1)原理:血细胞内的α-醋酸萘酚酯酶将基质液中的α-醋酸萘酚水解。产生α-萘酚,萘酚再与坚牢蓝B偶联,形成不溶性灰黑色或棕黑色沉淀,定位于胞质内。
(2)结果判断:染色阳性结果为胞质中出现棕黑色颗粒沉淀。
(3)正常血细胞的染色反应:
①原始单核细胞为阴性反应或弱阳性反应;幼单核细胞和单核细胞为阳性反应,反应可被氟化钠抑制。
②各期粒细胞为阴性反应,有时少数粒细胞可呈弱阳性反应,此反应不被氟化钠抑制。
③巨核细胞和血小板为阳性反应。
4幼红细胞和淋巴细胞一般为阴性反应;有时少数细胞也可是弱阳性反应;浆细胞为阴性反应。
(4)临床意义:
①帮助鉴别急性白血病的类型:单核细胞白血病时原始单核细胞可呈阳性反应;急性粒细胞白血病时原始粒细胞为阴性反应;急性淋巴细胞白血病时原始淋巴细胞为阴性反应。
②红血病和红白血病:异常幼红细胞呈阳性反应。
③巨幼细胞贫血:巨幼细胞呈阳性反应。
氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色
(1)原理:血细胞内的氯乙酸AS-D萘酚酯酶将基质液中的氯乙酸AS-D萘酚水解,产生萘酚AS-D,进而与基质液中的坚牢蓝GBC偶联,形成不溶性红色沉淀,定位于胞质内。
(2)结果判断:阳性结果为胞质内出现红色沉淀
①(—)胞质无色。
②(十)胞质呈淡红色。
③(++)鲜红色沉淀布满胞质。
④(+++)深红色沉淀充满胞质。
(3)正常血细胞的染色反应
①粒细胞系统:自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均为阳性反应,也称“粒细胞酶或特异性酶”。
②单核细胞为阴性反应,个别呈弱阳性。
(4)临床意义:主要鉴别急性白血病的类型。
碱性磷酸酶染色(NAP)
(1)原理(偶氮偶联法):血细胞内的碱性磷酸酶在pH9.4~9.6的条件下将基质液中的α-磷酸萘酚钠水解,产生α-萘酚与重氮盐偶联形成不溶性灰黑色沉淀,定位于酶活性所在之处。
(2)结果判断:阳性结果为胞质内出现灰褐色至深黑色颗粒状或片状沉淀。
①(-)灰褐色沉淀,0分。
②(+)胞质出现灰褐色沉淀,1分。
③(++)胞质深褐色沉淀,2分。
④(+++)胞质中已基本充满棕黑色颗粒状沉淀,3分。
⑤(++++)胞质中完全充满棕黑色颗粒状沉淀,4分。
(3)正常血细胞的染色反应
①除巨噬细胞可呈阳性反应外,其他血细胞均呈阴性反应。
②成熟中性粒细胞碱性磷酸酶积分值的计算:在油镜下,计数100个成熟中性粒细胞。分别记录其分级情况,全部阳性反应的细胞之和即为阳性率,将所有阳性反应细胞均以“+”级表示后计算其总积分值。
中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)积分正常参考值是:7-51分。
(4)临床意义
①生理变化:新生儿、在应激状态下紧张、恐惧、激烈运动等NAP活性可增高。月经周期中经前期增高,经后降低,经后期恢复。妊娠2~3个月的NAP积分值轻度增高,以后逐月增高,分娩时达高峰。
②病理性变化:见于可用来鉴别细菌性感染和病毒性感染、鉴别慢粒和类白血病反应及观察慢粒疗效的指标、鉴别急粒和急淋、鉴别阵发性睡眠性血红蛋白尿和再生障碍性贫血等。
过氧化酶染色(POX)
(1)原理:血细胞内的过氧化酶分解H2O2,释放初生态氧,使无色联苯胺氧化成蓝色联苯胺,后者进一步变成棕黑色化合物,沉着于胞质内。
(2)结果判断:阳性结果为胞质内出现棕黑色颗粒。
①(—)无颗粒。
②(±)颗粒细小、弥散分布。
③(+)颗粒较粗、局灶分布。
④(++)颗粒粗大、密集、分布较广。
⑤(+++)颗粒粗大、成团块,几乎布满胞质。
⑥(++++)颗粒成团块状,充满胞质,并覆盖胞核。
(3)正常血细胞的染色反应:
①粒细胞系统:原始粒细胞大多呈阴性反应,自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均呈阳性反应,随细胞的成熟,阳性反应的程度逐渐增强。
②单核细胞系统:原始单核细胞呈阴性反应,幼单核细胞和单核细胞呈弱阳性反应。
③其他细胞:淋巴细胞、巨核细胞、血小板、幼红细胞、浆细胞和组织细胞均呈阴性反应。
(4)临床意义
1)帮助鉴别急性白血病的类型:
①急性粒细胞白血病。
②小型原始粒细胞和原始淋巴细胞区别。
③急性早幼粒细胞白血病与急性单核细胞白血病鉴别。
④急性单核细胞白血病与组织细胞白血病或恶性组织细胞病鉴别。
2)成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化:
①活性增高:可见于再生障碍性贫血感染、急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病。
②活性减低:可见于急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病和急性单核细胞白血病等等。

