【免疫检测样本制备】
流式细胞仪测定的标本，不论是外周血细胞、培养细胞或组织来源细胞，首先要保证是单细胞悬液，对不同来源的细胞制备成单细胞悬液有不同的处理程序。
1.外周血淋巴细胞样品的制备
血和骨髓：天然单细胞悬液。当有血凝块时，应用50μm尼龙网过滤，同时进行细胞计数和血涂片以判断靶细胞群体是否仍然存在。一般采取密度梯度离心法。
2.培养细胞的样品制备
贴壁生长的单层细胞需要用蛋白酶消化后用机械法分离。
3.新鲜实体组织单细胞悬液的制备
一般采取机械法、酶处理法、化学试剂处理法和表面活性剂处理法等方法。分离不仅是要获得最大产量的单细胞悬液，还要尽量保证细胞结构的完整性和抗原性。大多数淋巴样组织可用轻柔的机械方法快速分离，并保持收获细胞的相对完整。某些组织由于细胞间连接紧密，需在机械分离的基础上用蛋白水解酶如胰蛋白酶、胃蛋白酶。骨髓标本亦可能因骨细胞成分污染而需要酶消化。但使用酶法一定要确认酶的使用没有改变、减弱靶抗原的表达，细胞活性没有显著降低。
4.单细胞悬液的保存
常用的处理方法有三种：
1.深低温保存法。
2.乙醇或甲醇保存法。
3.甲醛或多聚甲醛固定法。
【抗碱血红蛋白测定】
1.参考值：正常成人抗碱血红蛋白2%以下。抗碱血红蛋白随年龄而有变化。
不同年龄的抗碱血红蛋白。
年龄抗碱血红蛋白(%)
早产儿81.71±1.94(70.6～91.4)
足月儿69.79±1.47(45～89)
新生儿68.39±2.06(48.4～92.8)
1～3月35.74±4.11(7.49～81.7)
4～6月8.08±1.34(2.43～39.4)
7～12月3.39±0.29(1.37～7.8)
1～3岁2.58±0.15(1.02～4.73)
4～6岁1.81±0.12(0.9～3.18)
7～11岁0.81±0.06(0.4～1.7)
12～16岁0.93±0.06(0.4～1.5)
2.临床意义
重型β海洋性贫血HbF浓度显著升高，该试验中可达30%～90%，轻型海洋性贫血HbF可在轻度增高，该试验一般在2%～5%，有的也可正常，α海洋性贫血(HbH)的HbF在正常范围内，但该试验测定结果略高，因为HbBart′s也具有抗碱性。F(δβ)海洋性贫血、A2F海洋性贫血和γβ海洋性贫血的HbF均有较明显升高，δ海洋性贫血的HbF正常，此外遗传性球形红细胞增多症，再生障碍性贫血，白血病、恶性贫血、骨髓转移癌等HbF也可有轻度增高。杂合子遗传性胎儿血红蛋白持续存在综合征的HbF在15%以上，纯合子者100%但都没有明显的症状和血液形态学改变。
【感染性休克诊断】
严重感染特别是革兰氏阴性细菌感染常可引起感染性休克。感染性休克，亦称脓毒性休克，是指由微生物及其毒素等产物所引起的脓毒病综合征伴休克。感染灶中的微生物及其毒素、胞壁产物等侵入血循环，激活宿主的各种细胞和体液系统;产生细胞因子和内源性介质，作用于机体各种器官、系统，影响其灌注，导致组织细胞缺血缺氧、代谢紊乱、功能障碍，甚至多器官功能衰竭。这一危重综合征即为感染性休克。因此感染性休克是微生物因子和机体防御机制相互作用的结果，微生物的毒力数量以及机体的内环境与应答是决定感染性休克的发展的重要因素。
1.临床表现
(1)意识和精神状态(反映中枢神经系统的血流量)经初期的躁动后转为抑郁淡漠、甚至昏迷，表明神经细胞的反应性兴奋转抑制，病情由轻转重。原有脑动脉硬化或高血压患者，即使血压降至10.64/6.65kPa(80/50mmHg)左右时反应即可迟钝;而个别原体质良好者对缺氧的耐受性较高，但为时亦极短暂。
(2)呼吸频率和幅度(反映是否存在酸碱平衡失调或肺和中枢神经功能不全)
(3)皮肤色泽、温度和湿度(反映外周围血流灌注情况)皮肤苍白、紫绀伴斑状收缩，微循环灌注不足。甲床毛细血管充盈情况亦可作为参考。如前胸或腹壁出现瘀点或瘀斑，提示有DIC可能。
(4)颈静脉和外周静脉充勇情况静脉萎陷提示血容量不足，充勇过度提示心功能不人或输液过多。
(5)脉搏在休克早期血压尚未下降之前，脉搏多已见细速、甚至摸不清。随着休克好转，脉搏强度往往较血压先恢复。
(6)尿量(反映内脏灌流情况)通常血压在10.6kPa(80mmHg)上下时，平均尿量为20～30ml/h，尿量>50ml/h，表示肾脏血液灌注已足。
(7)甲皱微循环眼底检查 在低倍镜下观察甲皱毛细血管袢数、管径、长度、清晰度和显现规律，血色、血液流速、均匀度和连续性，红细胞聚集程度，血管舒缩状态和神清晰度等。休克时可见甲皱毛细血管袢数减少、管径细而缩短、显现呈断线状、充盈不良，血色变紫，血流迟缓失去均匀性，严重者有凝血。眼底检查可见小动脉痉挛、小静脉淤张、动静脉比例可由正常的2：3变为1：2或1：3，严重者有视网膜水肿。颅压增高者可见视乳头水肿。
2.血流动力学改变
(1)动脉压与脉压收缩压下降至10.64kPa(80mmHg)以下，原有高血压者下降20%以上，脉压<4kPa，并有组织低灌注表现者即可诊断为休克。低血压程度每与休克程度相关，但也有例外。
(2)中心静脉压(CVP)和肺动脉楔压(PAWP)CVP正常为0.59～1.18kPa(6～12cmH2O)，主要反映回心血量和右心室搏血功能，也可作为了解容量血管张力的参数，应结合血压加以判断。在心功能减损时，监测PAWP对指导输液防止肺水肿较CVP更为可靠。PAWP正常为1.06～1.6kPa(8～12mmHg)，能较好地反映左心室搏血功能，PAWP升高提示肺淤血，>2.4kPa(18mmHg)时应限制输液。
【抗人球蛋白试验】
1.参考值：正常人直接与间接试验均为阴性。
2.临床意义：直接试验是检查被检红细胞上有无不完全抗体，间接试验是检查血清中游离的不完全抗体。
3.本试验阳性结果主要见于下列几种情况：
(1)自身免疫性贫血，(IgG)型引起的溶血性贫血，本试验直接反应常呈强阳性，间接反应大多阴性，但亦可阳性。
(2)药物诱发的免疫性溶血性贫血①α-甲基多巴型：直接及间接反应均阳性。②青霉素型：直接反应阳性，间接反应阴性，以上二型如以正常红细胞先与有关药物于37℃培育后再加病人血清、间接反应均为阳性。③福阿亭型：(奎宁等药物)抗体通常为IgM，偶有IgG型者，直接反应为阳性，间接反应阴性，但如用IgG抗血清做试剂则结果大部分均为阴性，但如培育时加入新鲜正常人血清(供应补体)则结果为阳性。
(3)冷凝集素综合征直接反应阳性，间接反应阴性(试验需在37℃下进行)由于本病红细胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗IgG或抗IgM抗血清做试验时，则结果阴性，如以抗补体的抗血清做试验则直接反应阳性。
(4)新生儿同种免疫溶血病，因Rh血型不合所致溶血病，直接及间接反应均强阳性，持续数周、换血输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合引起的溶血病，结果常为阴性或弱阳性。
(5)红细胞血型不合引起的输血反应，ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏以前，直接反应阳性，Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾妊娠胎儿为Rh阳性者，间接反应阳性，如无上述接触，第一次输血后(Rh阳性的血)，数天之内间接反应也会变为阳性。
(6)其它在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等，病人直接反应亦可阳性，阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性发作后用抗补体血清做试验直接反应常为阳性。
【速率散射比浊分析】
1.基本原理
速率散射比浊分析是一种动力学测定方法，在一定条件下，抗原和相应的抗体很快结合成抗原抗体免疫复合物颗粒，速率比浊法就是在一定时间内抗原抗体结合过程中，测定二者结合的最大反应速度，即反应达顶峰峰值。所谓速率是抗原抗体结合反应过程中，在单位时间内两者结合的速度。速率法是测定最大反应速率，即在抗原抗体反应达最高峰时，通常为数十秒钟，测定其复合物形成的量。峰值的高低在抗体过量情况下与抗原的量成正比。峰值出现的时间与抗体的浓度及其亲和力直接相关。不同抗原含量其速率峰值不同，通过微电脑处理，求出抗原含量。
2.抗原过量检测
附：终点散射比浊法
其原理是让抗原抗体作用一定时间，使其反应达到平衡后，测定其复合物的量。复合物的浊度不再受时间的影响，但反应复合物聚合产生絮状沉淀之前(大约反应数十分钟)进行浊度测定。敏感度达mg/L水平，可自动化，但反应时间较长。
免疫胶乳比浊法
原理：选择一种大小适中，均匀一致的胶乳颗粒，吸附抗体后，当遇到相应抗原时，则发生凝集，单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过，当两个胶乳凝集时，则使透过光减少。这种减少的程度与胶乳凝集成正比，与抗原量成正比。该法敏感度高，试剂稳定，因反应液中无PEC沉淀剂的影响，个体IC对结果影响也小，所以结果稳定、可靠，特异性好;不需特殊仪器设备，一般分光光度计、自动化生化分析仪或散射比浊仪均可使用。
