药品检验的主要任务和方法
重点：一般杂质检查的方法与原理
(掌握反应试剂)
一、药品检验的任务和一般程序
1.药检任务：
药检工作是药品监督管理和药品质量控制的重要组成部分，是运用物理学、化学、物理化学和生物学的方法，对各种药物及其制剂进行质量检验，判断其质量是否符合药品质量标准的规定。药检工作不仅仅包括常规的检验，还应包括工艺流程、反应历程、生物体内代谢过程等方面的监测。药品检验可分为：抽检、委托检验、复核检验、注册检验、仲裁检验和进出口检验。
2.药品检验程序
(1)取样：
取样应具有科学性、真实性和代表性。取样的基本原则应该是均匀，合理。
(2)药品的鉴别：依据药物的化学结构和理化性质进行某些化学反应，测定某些理化常数或光谱特性，来判断药物及其制剂的真伪。
(3)药物的检查：药典中检查项下包括有效性、均一性、纯度要求与安全性四个方面;药物的纯度控制主要是通过对药物中存在的杂质检查来进行的。
(4)药物的含量测定：测定药物中主要有效成分的含量。化学分析、理化分析。
(5)留样：留样数量不得少于一次全项检验用量。留样检品保存一年，进口检品保存一年，中药材保存半年，医院制剂保存3个月。
(6)检验记录与报告：检验记录必须真实、完整、科学。
二、鉴别方法
(1)化学鉴别法：
呈色反应鉴别法主要有：
①三氯化铁呈色反应，适用于具有酚羟基或水解后产生酚羟基药物的鉴别，如：水杨酸、对乙酰氨基酚。
反应试剂：三氯化铁
②异羟肟酸铁反应适用于芳胺及其酯类药物或酰胺类药物的鉴别，如β-内酰胺类抗生素(青霉素);
反应试剂：盐酸羟胺、三氯化铁。
③茚三酮呈色反应适用于具有脂肪氨基或α-氨基酸结构药物的鉴别，如氨基糖苷类抗生素(链霉素、庆大霉素);
反应试剂：茚三酮。
④重氮化-偶合显色反应，适用于具有芳伯氨基或水解后产生芳伯氨基药物的鉴别，如：盐酸普鲁卡因。反应试剂：亚硝酸钠试液、β-萘酚试液。
⑤氧化还原显色反应适用于具有还原基团药物的鉴别，如：维生素C。
沉淀生成反应鉴别法主要有：
①与重金属离子的沉淀反应，如与银盐、铜盐的反应，如：巴比妥类药物;
②与硫氰化铬铵的沉淀反应;
③其他沉淀反应。
荧光反应法主要有三种情况：
①药物本身在可见光(或紫外光)下发射荧光;
②药物溶液加硫酸使呈酸性后，在可见或紫外光下发射荧光;
③药物与某些试剂如溴、间苯二酚、衍生化试剂等反应，于可见光下发射荧光。
气体生成反应鉴别法：利用药物与某些试剂在一定条件下反应可生成特征气体的原理，通过对此种气体的鉴别来确定药物种类的方法。主要有：
①胺类、酰脲类、酰胺类药物经强碱处理后，产生氨气;(含N的药物产生氨气)
②含硫的药物经强酸处理后，产生H2S气体;
③含碘的有机药物，加热，生成紫色碘蒸气;
④含醋酸酯、乙酰胺类药物水解后，加乙醇，产生醋酸乙酯的香味。(含酯键药物产生香味)
(2)光谱鉴别法：主要包括紫外光谱鉴别法和红外光谱鉴别法。
紫外光谱鉴别法(UV)：
200nm～400nm为紫外光区;——共轭双键
400nm～760nm为可见光区;——有色溶液
鉴别方法：
①测定最大吸收波长(λmax)，或同时测定最小吸收波长(λmin);
②规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度;
3.氯化物检查法
原理：利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银的白色混浊比色。
测定条件：
1)标准NaCl溶液 10gCl-/ml，在测定条件下，以50ml中含50～80μg的Cl-为宜，相当于标准NaCl溶液5～8ml。——原因：在此范围内氯化物所显浑浊梯度明显，便于比较。
2)反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。
加稀硝酸的目的：
①避免弱酸银盐沉淀的形成而干扰检查。
②加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊。
3)试剂：硝酸银
4)供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀
5)避光、暗处放置5分钟后比浊，——目的：防止AgCl见光分解
6)比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。
4.硫酸盐检查法
原理：利用SO42-与氯化钡在盐酸酸性溶液中生成硫酸钡的白色浑浊液，比较。
测定条件：
(1)标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.1～0.5mg的所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液1～5ml。
(2)反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。
加盐酸的目的：可防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀的生成 。
pH值约为1为宜——原因：若酸度过高，可使硫酸钡溶解度增大，检查的灵敏度下降。
(3)试剂：氯化钡。
(4)供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀。
(5)比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。
5.铁盐检查法
原理：铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，与对照比较。
测定条件：
(1)用FeNH4(SO4)2·12H2O(硫酸铁铵)配制标准铁贮备液(加入硫酸防止Fe3+的水解)，标准铁溶液10g Fe3+/ml，50ml溶液中含10～50g的Fe3+显色梯度明显，一般取标准铁溶液1.0～5.0ml。
(2)反应需在盐酸酸性条件下进行，防止Fe3+的水解.且以50ml供试溶液中含稀盐酸4ml为宜。
(3)试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行。
(4)加氧化剂氧化Fe2+为Fe3+。加过硫酸铵可氧化Fe2+为Fe3+，同时可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。
(5)比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。
氯化物、硫酸盐、铁盐检查方法的比较
③规定吸收波长和吸收系数法;
6.铵盐检查法
原理：将供试品中的铵盐碱化后蒸馏出来，与碱性碘化汞钾试液反应而呈色，与标准氯化铵溶液同法显色进行比较。
7.干燥失重：
系指药品在规定的条件下，测定药品中所含能被驱去的挥发性物质，既包括水分，如吸附水，也包括其他挥发性物质，如残留有机溶剂等。照药品项下规定的条件干燥至恒重，从减失的重量和取样量计算供试品的干燥失重。
方法：常压恒温干燥法、干燥剂干燥法、减压干燥法和热分析法。
8.费休水分测定法：可以准确的测定药物中的结晶水、吸附水和游离水，不包括其他挥发性物质。——仪器测定。
四、药物制剂通则检查
(一)片剂、胶囊剂
片剂包括普通片、含片、口腔贴片、咀嚼片、分散 片、可溶片、泡腾片、阴道片、阴道泡腾片、缓释片、控释片与肠溶片等。
检查项目：
多数片剂应进行重量差异和崩解时限检查;
口腔贴片应进行溶出度或释放度以及微生物检查;
咀嚼片不进行崩解时限检查;
分散片应进行溶出度和分散均匀性检查;
阴道片应进行融变时限和微生物限度检查;
阴道泡腾片作发泡量和微生物限度检查;
肠溶片检查释放度;
缓释片与控释片均应检查释放度;
胶囊剂分为硬胶囊、软胶囊、缓释胶囊、控释胶囊和 肠溶胶囊。
除另有规定外，应进行装量差异和崩解时限检查;
缓、控释胶囊和肠溶胶囊应做释放度检查。
(1)重量差异检查：重量差异是指按规定称量方法测得每片的重量与平均片重之间的差异程度。
检查意义：在片剂生产中，由于颗粒的均匀度、流动性及生产设备等原因可使片剂重量产生差异影响临床用药，所以应规定该项检查。(片重差异影响临床用药)
检查方法：取药片20片，精密称定总重量，求得平均片重，再分别精密称定每片的重量，计算每片片重与平均片重差异的百分率。
要求：
表 片剂重量差异的限度
结果判断：超出重量差异限度的药片不得多于2片，并不得有一片超出限度1倍。
④规定吸收波长和吸收度比值法;
⑤经化学处理后测定其反应产物的吸收光谱特性。
红外光谱法：
采用标准图谱对照法
(3)色谱鉴别法：包括TLC法、HPLC法和GC法。
TLC法一般采用对照品(标准品)比较法，要求供试品斑点的比移值(Rf)与对照品的一致。
HPLC法和GC法一般采用对照品(标准品)比较法，要求供试品溶液中药物色谱峰的保留时间(tR)与对照品的一致
供试品 对照品
图 用已知纯物质与未知样品对照比较进行性分析
1～9—未知物的色谱峰 a—甲醇峰 b—乙醇峰
c—正丙醇峰 d—正丁醇峰 e—正戊醇峰
三、杂质及其检查方法
(一)杂质
1.杂质的来源：生产过程中引入、贮藏过程中引入。
2.杂质分类
一般杂质：指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属等。
特殊杂质：指在个别药物的生产和贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林在生产和贮存过程中会引入水杨酸。
3.杂质限量与限量检查
杂质限量：指药物中允许杂质存在的最大量，通常用百分之几或百万分之几(ppm)来表示;
S：供试品的量，C：杂质标准溶液的浓度，V杂质标准溶液的体积，L杂质限量。
(二)一般杂质检查方法与原理
1.重金属检查法
检查重金属：银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属。
《中国药典》重金属检查法一共收载有三法，以Pb为代表。
(1)硫代乙酰胺法
原理：
适用范围：适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物
测定条件：
①每1ml含10μgPb的标准铅溶液，适宜比色范围为27ml溶液中含10～20g的Pb2+。
②用醋酸盐缓冲液(pH3.5)控制溶液pH值为3～3.5。
③试剂：硫代乙酰胺。
(2)炽灼残渣法
适用范围：适用于含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸及乙醇的有机药物。
原理：500～600℃炽灼后的残渣，经处理后，依一法检查。
(3)硫化钠法
适用范围：溶于碱溶液，而不溶于酸溶液的药物。如磺胺类、巴比妥类。
原理：
重金属检查法的比较
2.砷盐检查法
《中国药典》采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法检查药物中微量的砷盐。
古蔡法：
原理：是利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应，生成具有挥发性的砷化氢气体，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液在相同条件下所生成的砷斑比较，来判断药物中砷盐的含量。
二乙基二硫代氨基甲酸银法
原理：砷化氢与Ag-(DDC)吡啶溶液作用，使Ag-(DDC)中的银还原为红色胶态银，直接比色或于510nm波长处测定吸收度，进行比较。
3.氯化物检查法
原理：利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银的白色混浊比色。
测定条件：
1)标准NaCl溶液 10gCl-/ml，在测定条件下，以50ml中含50～80μg的Cl-为宜，相当于标准NaCl溶液5～8ml。——原因：在此范围内氯化物所显浑浊梯度明显，便于比较。
2)反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。
加稀硝酸的目的：
①避免弱酸银盐沉淀的形成而干扰检查。
②加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊。
3)试剂：硝酸银
4)供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀
5)避光、暗处放置5分钟后比浊，——目的：防止AgCl见光分解
6)比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。
4.硫酸盐检查法
原理：利用SO42-与氯化钡在盐酸酸性溶液中生成硫酸钡的白色浑浊液，比较。
测定条件：
(1)标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.1～0.5mg的所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液1～5ml。
(2)反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。
加盐酸的目的：可防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀的生成 。
pH值约为1为宜——原因：若酸度过高，可使硫酸钡溶解度增大，检查的灵敏度下降。
(3)试剂：氯化钡。
(4)供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀。
(5)比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。
5.铁盐检查法
原理：铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，与对照比较。
测定条件：
(1)用FeNH4(SO4)2·12H2O(硫酸铁铵)配制标准铁贮备液(加入硫酸防止Fe3+的水解)，标准铁溶液10g Fe3+/ml，50ml溶液中含10～50g的Fe3+显色梯度明显，一般取标准铁溶液1.0～5.0ml。
(2)反应需在盐酸酸性条件下进行，防止Fe3+的水解.且以50ml供试溶液中含稀盐酸4ml为宜。
(3)试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行。
(4)加氧化剂氧化Fe2+为Fe3+。加过硫酸铵可氧化Fe2+为Fe3+，同时可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。
(5)比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。
6.铵盐检查法
原理：将供试品中的铵盐碱化后蒸馏出来，与碱性碘化汞钾试液反应而呈色，与标准氯化铵溶液同法显色进行比较。
7.干燥失重：
系指药品在规定的条件下，测定药品中所含能被驱去的挥发性物质，既包括水分，如吸附水，也包括其他挥发性物质，如残留有机溶剂等。照药品项下规定的条件干燥至恒重，从减失的重量和取样量计算供试品的干燥失重。
方法：常压恒温干燥法、干燥剂干燥法、减压干燥法和热分析法。
8.费休水分测定法：可以准确的测定药物中的结晶水、吸附水和游离水，不包括其他挥发性物质。——仪器测定。
