1.定量羟基蒽醌衍生物的方法介绍
定量方法: 一般有重量法、容量法、萤光法、比色法等。以比色法应用zui广泛。主要原理是利用羟基蒽醌衍生物与碱液生成红色进行比色。且因游离的羟基蒽醌类一般生物活性较其甙类小、故要测定结合蒽醌的含量。兹简介比色法如下:
a)标准曲线的制备: 精密称取50mg左右的1,8一二羟基蒽醌,于250ml容量并中用乙醚溶解并稀释至刻度。精密量取上述标准液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00m1,分别放人25ml容量瓶中,在水溶上蒸去乙醚,加5%氢氧化钠及2%氢氧化铵混合碱液至刻度,摇匀,30分钟后比色,以试剂为空白对照,绘出光密度——浓度的曲线。
b)测定方法:
(1)游离蒽醌的测定: 药材粉末(40目)0.1~29,在索氏提取器中以氯仿提取至无色,氯仿液以5%氢氧化钠及2%氢氧化铵混合碱液萃取至无色。碱液用少量氯仿洗涤,过滤,沸水浴中加热4分钟,冷至室温,调整至一定体积,30分钟后同上法比色,由标准曲线计算含量。
(2)结合蒽醌的测定: 药材粉末(40目)0.1~1g于三角烧瓶中加30m1 5N硫酸液回流水解2小时,稍冷后加30ml氯仿继续回流1小时,用吸管吸出氯仿液,加入20ml氯仿继续回流1小时,吸出氯仿液后再加10ml氯仿,重复操作至提取液无色。合并氯仿液,用少量蒸馏水洗涤,用同上混合碱液同法进行比色测定,测得之总蒽醌含量减去游离蒽醌含量,即得结合蒽醌含量。
2.两种制备中草药的沉淀法概述
沉淀法是在中草药提取液中加入某些试剂使产生沉淀,以获得有效成分或除去杂质的方法。
(1)铅盐沉淀法:
铅盐沉淀法为分离某些中草药成分的经典方法之一。由于醋酸铅及碱式醋酸铅在水及醇溶液中,能与多种中草药成分生成难溶的铅盐或络盐沉淀,故可利用这种性质使有效成分与杂质分离。中性醋酸铅可与酸性物质或某些酚性物质结合成不溶性铅盐。因此,常用以沉淀有机酸、氨基酸、蛋白质、粘液质、鞣质、树脂、酸性皂甙、部分黄酮等。可与碱式醋酸铅产生不溶性铅盐或络合物的范围更广。通常将中草药的水或醇提取液先加入醋酸铅浓溶液,静置后滤出沉淀,并将沉淀洗液并入滤液,于滤液中加碱式醋酸铅饱和溶液至不发生沉淀为止,这样就可得到醋酸铅沉淀物、碱式醋酸铅沉淀物及母液三部分。
然后将铅盐沉淀悬浮于新溶剂中,通以硫化氢气体,使分解并转为不溶性硫化铅而沉淀。含铅盐母液亦须先如法脱铅处理,再浓缩精制。硫化氢脱铅比较彻底,但溶液中可能存有多余的硫化氢,必须先通人空气或二氧化碳让气泡带出多余的硫化氢气体,以免在处理溶液时参与化学反应。新生态的硫化铅多为胶体沉淀,能吸咐药液中的有效成分,要注意用溶剂处理收回。脱铅方法,也可用硫酸、磷酸、硫酸钠、磷酸钠等除铅,但硫酸铅、磷酸铅在水中仍有一定的溶解度,除铅不彻底。用阳离子交换树脂脱铅快而彻底,但要注意药液中某些有效成分也可能被交换上去,同时脱铅树脂再生也较困难。还应注意脱铅后溶液酸度增加,有时需中和后再处理溶液,有时可用新制备的氢氧化铅、氢氧化铝、氢氧化铜或碳酸铅、明矾等代替醋酸铅、碱式醋酸铅。例如在黄芩水煎液中加入明矾溶液,黄芩甙就与铝盐络合生成难溶于水的络化物而与杂质分离,这种络化物经用水洗净就可直接供药用。
(2)试剂沉淀法:
例如在生物碱盐的溶液中,加入某些生物碱沉淀试剂(见生物碱性质下),则生物碱生成不溶性复盐而析出。水溶性生物碱难以用萃取法提取分出,常加入雷氏铵盐使生成生物碱雷氏盐沉淀析出。又如橙皮甙、芦丁、黄芩甙、甘草皂甙均易溶于碱性溶液,当加入酸后可使之沉淀析出。某些蛋白质溶液,可以变更溶液的pH值利用其在等电点时溶解度zui小的性质而使之沉淀析出。此外,还可以用明胶、蛋白溶液沉淀鞣质;胆甾醇也常用以沉淀洋地黄皂甙等。可根据中草药有效成分和杂质的性质,适当选用。
3.生物碱概述
(1)含义:含氮(N)有机化合物,多数具有复杂的氮杂环,大多氮原子在环内,具有碱性和显著的生物活性。
(2)分布:主要分布于植物界,绝大多数存在于双子叶植物中,如毛茛科、防己科、茄科、马钱科、豆科、小檗科、罂粟科等。单子叶植物也有少数科属存在生物碱,如石蒜科、百合科、兰科等。少数裸子植物如麻黄科、红豆杉科、三尖杉科和松柏科也存在生物碱。
(3)存在形式:在植物体内,有一定碱性的生物碱多以有机酸盐形式存在;少数碱性极弱的生物碱以游离态存在;其他形式存在尚有以生物碱苷及 N-氧化合物等。
按结构类型分类
主要结构类型如下:生物碱类、有机酸类、苯丙素类、香豆素类、木脂素类、醌类、黄酮类、萜类、三萜皂苷、甾体皂苷、强心苷和鞣质等化合物。
4.单糖
中药中常见的单糖及其衍生物有:
五碳醛糖:D-木糖、L-阿拉伯糖、D-核糖。
六碳醛糖:D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖。
甲基五碳醛糖:L-鼠李糖、D-鸡钠糖、L-夫糖。
六碳酮糖:D-果糖。
糖醛酸:D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖醛酸。
中药有效成分常用的提取方法及特点
提取中药材化学成分的方法有溶剂法(主要)、水蒸气蒸馏法及升华法等。
溶剂提取法:
(1)溶剂的分类和极性
水:强极性溶剂,可用于提取糖类、苷类、氨基酸、蛋白质、有机酸盐、生物碱盐等。
亲水性有机溶剂:甲醇、乙醇、丙酮;可提取苷类、生物碱、鞣质等。
亲脂性有机溶剂:乙醚、氯仿;可提取游离苷元、挥发油、游离甾体及三萜皂苷。
常用溶剂的极性大小顺序:己烷<苯<氯仿<乙醚(无水)<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水
(2)溶剂提取方法浸渍法:水或稀醇为溶剂
【提取分离方法】
根据物质分子大小差别进行分离
(1)凝胶过滤色谱法
常用的有葡聚糖凝胶(Sephadex G),及羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)等。在水中不溶,可膨胀。且葡聚糖凝胶只适于在水中应用。羟丙基葡聚糖凝胶适于不同类型的有机物的分离。
分离原理:根据分子量大小,大分子物质首先被洗出。
(2)膜分离法:
以外界能量或化学位差为推动力,对多组分进行分离、分级、提纯或富集。
主要技术:渗透、反渗透、超滤、电渗析、液膜技术。常用透析法除无机盐。
吡啶类生物碱
(1)简单吡啶类:分子较小,结构简单,多呈液态。如槟榔中含有的槟榔碱、槟榔次碱,烟草中含有的烟碱和胡椒中含有的胡椒碱等。
(2)双稠哌啶类:基本母核为喹喏里西啶。如野决明中的金雀花碱,苦参中苦参碱、氧化苦参碱

